血液樣本是ELISA中最常見的生物液體樣本，其中在檢測(cè)上有全血、血清、血漿、血凝塊和血細(xì)胞的區(qū)分，ELISA常用血清和血漿
血液是一種流體組織，在心血管系統(tǒng)內(nèi)循環(huán)流動(dòng)，起著運(yùn)輸物質(zhì)的作用。血液組織是結(jié)締組織的一種，由血漿和血細(xì)胞組成。
血漿內(nèi)含血漿蛋白（白蛋白、球蛋白、纖維蛋白原）、脂蛋白等各種營(yíng)養(yǎng)成分以及無機(jī)鹽、氧、激素、酶、抗體和細(xì)胞代謝產(chǎn)物等。血細(xì)胞有紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板。
哺乳類的血液具有凝血機(jī)制，血管破裂時(shí)，血小板會(huì)結(jié)集，堵塞血管破口，此時(shí)血漿中原本可水溶的血纖維蛋白等凝固成為血塊，剩余的透明液體就叫做血清。
從采集樣本來說，直接抽取采集的為全血，呈紅色。靜置后1-2h，會(huì)發(fā)生凝血反應(yīng)，形成血清（呈黃色透明液體）和血凝塊。在收集管中提前加入抗凝劑，混勻后離心，即可分離出血漿。
血清和血漿樣本的主要區(qū)別在于血漿中抗凝劑和凝血因子的影響。
多數(shù)指標(biāo)中血漿樣本可以替代血清，前提是該指標(biāo)不受抗凝劑成分和凝血因子的影響（如抗體類項(xiàng)目），但生化指標(biāo)則不可用EDTA抗凝分離血漿，因?yàn)镋DTA-K2此種抗凝劑不僅可以絡(luò)合重金屬M(fèi)g2+，也會(huì)致使K+的含量上升，故生化指標(biāo)的最佳樣本是血清。一般全血能收集到30-50%左右的血清/血漿。
血紅蛋白類指標(biāo)需采用溶血?jiǎng)┢扑檠?xì)胞后來進(jìn)行測(cè)定，凝血因子類指標(biāo)需使用血漿，其他部分指標(biāo)血清血漿中有較大差異，血清血漿樣本類型的選取，建議多參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，選擇合適的樣本類型。
| 常見的采血管
真空采血管是采血材料中裝血液標(biāo)本的試管，管內(nèi)有真空壓力，在護(hù)士采血操作穿刺達(dá)到血管后，把穿刺針另一端插入試管，血管內(nèi)的血液通過管內(nèi)真空壓力自然把血管內(nèi)的血液往試管內(nèi)排出，當(dāng)達(dá)到一定采血量后管內(nèi)的壓力自然減小，不會(huì)繼續(xù)出血。需要護(hù)士采血操作時(shí)使用，如果是事先把試管蓋打開，管內(nèi)的壓力就會(huì)改變，不是成負(fù)壓狀態(tài)就沒有真空壓力的作用。
除紅頭管無添加外，其他采血管中均含有添加劑，需采血后顛倒混勻5/8次。血清管凝集后離心分離出血清，血漿管需要混勻后離心分離出血漿。用于ELISA測(cè)試的樣本建議于 4℃保存24h 內(nèi)完成離心分離，避免長(zhǎng)時(shí)間存放/凍融引起血細(xì)胞破碎，發(fā)生溶血反應(yīng)影響ELISA實(shí)驗(yàn)。
動(dòng)物采血管少量采血，建議采用無菌無毒素的離心管收集，自然凝集后離心分離血清；或抗凝離心管（肝素/EDTA分離血漿），輕輕顛倒混勻后離心分離血漿。
| 剪尾取血法
將清醒鼠裝入深顏色的布袋中，將鼠身裹緊，露出尾巴，用酒精涂擦或用溫水浸泡使血管擴(kuò)張，剪斷尾尖后，尾靜脈血即可流出，用手輕輕地從尾根部向尾尖擠捏，可取到一定量的血液。取血后，用棉球壓迫止血。也可采用交替切割尾靜脈方法取血。用一鋒利刀片在尾尖部切破一段尾靜脈，靜脈血即可流出，每次可取0.3～0.5 ml，供一般血常規(guī)實(shí)驗(yàn)。三根尾靜脈可替換切割，由尾尖向根部切割。由于鼠血易凝，需要全血時(shí)，應(yīng)事先將抗凝劑置于采血管中，如用血細(xì)胞混懸液，則立即與生理鹽水混合。
| 眼球后靜脈叢取血法
左手持鼠，拇指與中指抓住頸部皮膚，食指按壓頭部向下，阻滯靜脈回流，使眼球后靜脈叢充血，眼球外突。右手持1％肝素溶液浸泡過的自制吸血器，從內(nèi)呲部刺入，沿內(nèi)下眼眶壁，向眼球后推進(jìn)4～5 mm，旋轉(zhuǎn)吸血針頭，切開靜脈叢，血液自動(dòng)進(jìn)入吸血針筒，輕輕抽吸血管(防止負(fù)壓壓迫靜脈叢使抽血更困難)，拔出吸血針，放松手壓力，出血可自然停止。也可用特制的玻璃取血管(管長(zhǎng)7～10 cm，前端拉成毛細(xì)管，內(nèi)徑0.1～1.5 mm，長(zhǎng)為1 cm，后端管徑為0.6 cm)。必要時(shí)可在同一穿刺孔重復(fù)取血。此法也適用豚鼠和家兔。
| 眼眶取血法
左手持鼠，拇指與食指捏緊頭頸部皮膚，使鼠眼球突出，右手持彎鑷或止血鉗，鉗夾一側(cè)眼球部，將眼球摘出，鼠倒置，頭部向下，此時(shí)眼眶很快流血，將血滴入預(yù)先加有抗凝劑的玻璃管內(nèi)，直至流血停止。此法由于取血過程中動(dòng)物未死，心臟不斷跳動(dòng)，一般可取鼠體重4％～5％的血液量，是一種較好的取血方法，但只適用一次性取血。
| 心臟取血
動(dòng)物仰臥固定于鼠板上，用剪刀將心前區(qū)毛剪去，用碘酒、酒精消毒此處皮膚，在左側(cè)第3～4肋間用左手食指摸到心搏，右手持連有4～5號(hào)針頭的注射器，選擇心搏最強(qiáng)處穿刺，當(dāng)針頭正確刺入心臟時(shí)，鼠血由于心臟跳動(dòng)的力量，血自然進(jìn)入注射器。
| 斷頭取血
實(shí)驗(yàn)者帶上棉手套，用左手抓緊鼠頸部位，右手持剪刀，從鼠頸部剪掉鼠頭迅速將鼠頸端向下，對(duì)準(zhǔn)備有抗凝劑的試管，收集從頸部流出的血液，小鼠可取血0.8～1.2 ml，大鼠可取血5～10 ml。
| 頸動(dòng)靜脈、股動(dòng)靜脈取血
麻醉動(dòng)物背位固定，一側(cè)頸部或腹股溝部去毛，切開皮膚，分離出靜脈或動(dòng)脈，注射針沿動(dòng)靜脈走向刺入血管。20 g小鼠可抽血0.6 ml，300 g大鼠可抽血8 ml。也可把頸靜脈或頸動(dòng)脈用鑷子挑起剪斷，用試管取血或注射器抽血，股靜脈連續(xù)多次取血時(shí)，穿刺部位應(yīng)盡量靠近股靜脈遠(yuǎn)心端。
| ELISA操作前必讀 / 下載
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